Initiation théorique et eXPérimentale aux techniques de base de la biologie moléculaire

Cours théoriques :
- l'ADN, structure, information génétique, réplication, transcription, traduction,
- le clonage.

Outils :
- enzymes de restriction et de modification,
- les vecteurs (réplication, sélection, marqueurs...),
- la transformation bactérienne.

Moyens d'analyse :
- extraction d'ADN,
- analyse par restriction, électrophorèse,
- la PCR comme moyen de détection,
- l'hybridation moléculaire sur transferts d'ADN et sur colonies bactériennes.

Travaux pratiques
Clonage d'une "cassette" portant un gène de résistance au chloramphenicol (CAT) dans un vecteur de "type pUC"
- amplification par PCR d'un fragment d'ADN portant le gène CAT, purification sur gel,
- préparation du vecteur, ligation, transformation de bactéries compétentes,
- sélection des clones recombinants exprimant la résistance,
- analyse moléculaire des recombinants,
- amplification PCR sur colonies,
- extraction d'ADN plasmidique, analyse par restriction/électrophorèse,
- hybridation sur colonies et sur transfert d'ADN sur membrane ("southern blot").