La Culture Cellulaire

Introduction Définition Fonction/Utilisation/Applications Théorie cellulaire La cellule, une unité de vie Les énoncés de la théorie cellulaire Caractéristiques propres aux organismes pluricellulaires Cohésion Spécialisation (notion de cellules souches) Organisation hiérarchique Coordination des activités Structure de la cellule eucaryote Membrane plasmique, Noyau, Cytosquelette, Reticulum endoplasmique, Appareil de Golgi, Mitochondrie Propriétés des membranes Endocytose Adhérence Communication Prolifération, différenciation et mort cellulaire Les cellules Les modalités d’obtention des cellules A partir d’explants d’organes entiers A partir d’explants d’organes dissociés A partir de cellules en suspension

• Les systèmes cellulaires La culture primaire Les lignées cellulaires Les cellules souches
• La prolifération cellulaire et passage Courbe de croissance en culture – Conséquences Passage (ou repiquage) Sénescence
• La transformation cellulaire – l’immortalisation et la transformation tumorale Définition - Principe Protocoles Exemple de transformation tumorale in vitro Intérêts – Limite
• Le milieu de culture et les conditions de culture Les contraintes liées aux systèmes vivants Le respect du pH La température L’osmolarité Les constituants de base des milieux de culture Les additifs : es antibiotiques et antifongiques, les facteurs de croissance et les hormones Les milieux de composition définie
• Les systèmes de culture cellulaire Les cellules non-adhérentes Les cellules adhérentes En monocouche En suspension En 3D
• Le transfert en Industrie Rollers Fermenteurs Purification et tri des cellules Cytométrie en flux Billes magnétiques Viabilité et Cytotoxicité Etude de Protocoles La conservation des lignées cellulaires Introduction : les 5 grandes catégories de lignées cellulaires Obtenir une lignée cellulaire Les banques de référence Acheter une lignée Fabriquer une lignée
• Cryo-conservation des lignées cellulaires Utilisation de l’azote et sécurité Congélation Décongélation Traçabilité
• Les contaminations en culture de lignées cellulaires Introduction Les principales contaminations Moisissures, levures, bactéries, Cas particulier : les mycoplasmes Virus Autre lignée cellulaire Endotoxines
• La détection des contaminations Observation des cultures
• Tests de détection des mycoplasmes
• Prévention des contaminations Contamination isolée / récurrente Utilisation et entretien du matériel Procédures et bonnes pratiques