Caractérisation des Protéines par Spectrométrie de Masse. Identification des Protéines par

• Le programme ci-dessous sera adapté en fonction de la demande des participants.
• Décoloration, digestion d’une tache excisée d’un gel électrophorèse.
• Approche manuelle.
• Préparation d’une cible pour l’analyse MALDI.
• Prise des spectres de masse sur un spectromètre MALDI-TOF.
• Mis en œuvre des robots pour l’excision des tâches, la digestion et la préparation de cible.
• Mise en forme des données. Interrogation des banques de données. Identification des protéines connues ou prédites.
• Préparation d’un échantillon pour l’analyse nano-ESI.
• Prise des spectres de masse sur un spectromètre ESI-Q-q-TOF et/ou sur un piège ionique (MSn) en utilisant des aiguilles de nano-ESI.
• Techniques MS/MS.
• Réalisation de spectres MALDI-TOF-PSD ou ESI-MS/MS.
• Séquençage de novo.
• Interrogation des banques de données.
• Identification des protéines inconnues.
• Couplage nano-LC-nano-ESI.
• Paramètres du séquençage automatique pour la fragmentation MS/MS.
• Présentation des techniques ICAT et DIGE.. Matériels utilisés

Spectromètres de masse : MALDI-TOF, ESI-Q-q-TOF, ESI-Ion Trap.

Chromatographies : ionique et/ou par gradient de pH , nano-LC. Robots : exciseur, digesteur, de dépôt sur cible. Analyseur d’image pour gels colorés avec des marqueurs fluorescents. Logiciels d’analyse d’image de nouvelle génération.